研究课题负责人： 郭三堆 

项目负责人： 郭三堆

项目名称： 高甜度monellin的中试生产

项目类别： IA3

项目综合简介： 随着人们生活质量和健康水平的提高与改善，对热量低又安全的食品添加剂及甜味剂的需求越来越迫切。 Monellin是一种新型蛋白质甜味剂，甜度是蔗糖的3000-4000倍，热量低，又不易被细菌所利用，适于糖尿病、心血管病等患者食用，且能预防儿童龋齿，因而它是一类很有商业化发展前途的甜味添加剂。目前市场价格极其昂贵，约为7.2美元/毫克。本实验室已经根据monellin的氨基酸序列，设计合成了monellin基因，构建了细菌表达载体，转入大肠杆菌，获得了可高效表达甜蛋白的基因工程菌。可通过发酵培育，从菌体中大量分离纯化monellin甜蛋白。同时，采用酵母优化密码子，合成了monellin基因并构建了酵母表达载体pPIC9M，电击转化后获得重组毕赤酵母GS115／pPIC9M。在此表达系统中，高甜度monellin的摇瓶表达量约0.25g/L，30L发酵罐分泌表达量约2g/L。

项目技术特点优势： 利用本项目生产的甜味剂monellin具有甜度高、热量低、不易被细菌所利用等特点，因而具有良好的商业化应用前景。本项目应用的重组毕赤酵母GS115／pPIC9M 30L发酵罐表达量约2g/L；并且，甜味剂monellin为分泌表达，产品纯化程序简单。

项目鉴定和获奖情况： 2001年，“利用大肠杆菌生产高甜度monellin”通过了成果鉴定，“利用酵母分泌生产monellin”尚未进行成果鉴定。

项目知识产权情况： 相关技术已申请4项中国发明专利，其中“编码甜蛋白的合成DNA序列及生产该蛋白质的方法”（专利号：ZL 95 1 17885.7）和“高甜度莫奈灵DNA序列及高效表达所述DNA序列的方法”（专利号：ZL 98 1 02420.3）已获专利证书；“适用于高密度发酵的毕赤酵母新菌株”（专利公开号：CN 1546646A）和“用毕赤酵母分泌表达高甜度莫奈灵”（专利公开号：CN 1546663A）均已进入公开实审阶段。

项目原料要求： 利用酵母分泌生产甜味剂monellin使用的培养基有两种，（1）BMGY培养基（生长培养基）：1%酵母提取物，2%蛋白胨，100mmol/L磷酸缓冲液（PH6.0），1.34%YNB，0.00004%Biotin，1%甘油（V/V）；（2）BMMY培养基（诱导表达培养基）：除以0.5%甲醇代替甘油，其余成分与BMGY相同。

适用范围和地区： 适宜作为少年儿童预防龋齿以及糖尿病、肥胖症、高血压、心血管病等患者使用的甜味剂。

市场预测： 据调查，甜味剂monellin的市场容量约在200亿美元左右。

风险因素： ／ 

投资规模/转让价格： 3000万元左右